HPLC 크로마토그래피를 통한 IVT 반응의 생산성 향상

Jun 15, 2023

우리가 방송하는 기능은 다음과 같습니다.Rok Sekirnik 박사, 공정 개발 mRNA/pDNA 책임자, BIA Separations, 현재 Sartorius 회사.

시험관내 전사(IVT) 반응은 일반적으로 배치 공정으로 수행됩니다. 촉매 기반을 고려할 때, 소비된 시약을 반응 혼합물에 지속적으로 첨가하여 반응 시간과 수율을 연장하는 것이 가능합니다. 그러나 현재까지 보고된 유가식 전략은 mRNA 생산을 40~100% 증가시키는 데에만 성공했습니다. 개발의 주요 한계 중 하나는 mRNA 및 NTP 전구체의 정량화를 위한 분석 처리량이 낮다는 것입니다. 생산성은 일반적으로 mRNA 농도의 종말점 측정으로 결정됩니다.

본 웨비나에서는 음이온 교환/수소 결합 리간드(PrimaS) 기반 다중 모드 리간드를 사용하여 IVT 반응을 모니터링하는 HPLC 기반 분석 방법에 대해 논의합니다. 이를 통해 NTP, 캡핑 시약, 플라스미드 및 mRNA를 동시에 정량화할 수 있습니다. 3.5분 이내.

IVT 반응 모니터링에 적용할 경우 평균 생산성이 3~5mg/mL인 배치 방식을 유가 방식으로 전환하여 10~12mg/mL를 산출할 수 있습니다. IVT 반응을 제어하기 위한 두 가지 접근법이 입증될 것입니다. 하나는 캡핑되지 않은 mRNA의 생산성에 초점을 맞추고, 다른 하나는 캡핑된 mRNA의 생산성에 중점을 두므로 NPT:캡핑 시약 비율의 정확한 제어가 필요합니다.

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